Après des études de peinture à l’École des Beaux-Arts de Rouen, Florence Fontaine se découvre une réelle passion pour le théâtre et le cinéma.

Elle décide de s’inscrire au cours « René Simon » en 1992. Puis, dans l’Atelier de théâtre de Catherine Hérold, elle interprètera successivement : « Julie » dans « Le Défunt » de René de Obaldia, « Tognina » dans « L’imprésario de Smyrne » de Carlo Goldoni, et Lora, dans « Circulez ! » un monologue de Luigi Pirandello au Théâtre de La Bonne Graine. Au sein de la même compagnie, dans laquelle elle restera sept ans, elle obtient avec les autres comédiens, le Prix du Public au « Festival d’Été » du onzième arrondissement, pour « Ball-Trap » de Xavier Durringer.

En 2002, dirigée par Marzia Kollmansberger, elle joue dans « Mha ou le reniement » d’Étienne Rebaudengo, au Théâtre de Ménilmontant.

C’est grâce à Jean-Laurent Cochet, chez qui elle passe trois ans, qu’elle rejoint « Les Compagnons de La Chimère » en 2004. Elle y interprète « Rose d’Orange » dans « Harold et Maud » de Collin Higgins mise en scène par Arnaud Denis.

Parallèlement, elle tourne dans « Mister Fourmi », court-métrage réalisé par Sébastien Burnet.

Enfin, pendant plus de trois cents représentations à Paris et en Province, elle joue « La Bonne Mary » dans « La Cantatrice Chauve » mise en scène par Arnaud Denis.

Entre 2007 et 2019, elle enchaîne des tournages de films au cinéma et à la télévision, un clip avec Emmanuelle Seigner et participe à l’émission humoristique « Groland.con » sur Canal Plus.

Dans ses moments libres, elle est coach pour d’autres comédiens.